Pull down
Pull down实验又叫做蛋白质体外结合实验(binding assay in
vitro),是一种在试管中检测研究蛋白质之间相互作用的方法,旨在证明两种蛋白质之间存在相互作用或者探索可与目的蛋白结合的未知蛋白分子。Pull-Down实验是一个行之有效的体外检测蛋白之间直接相互作用的技术,其基本技术原理是:将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的目的蛋白,洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选到相应的目的蛋白。Pull-Down实验不同于IP或Co-IP之处在于,它不是基于抗体-抗原特异反应的相互作用,不是免疫反应。诱饵蛋白或配体,通过非抗体亲和系统固定到固相支持物上,这种固定可以通过共价偶联结合到活化的微珠上,也可以通过与支持物上的受体分子结合的亲和标签结合,从而达到固定作用。Pull
down实验适用于体外转录或翻译体系研究,一是鉴定能与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质;二是鉴定两个已知蛋白质之间是否存在相互作用。