通过化学转染或电转染法将gRNA载体（含Cas9）和ssOND共转入细胞中，gRNA和Cas9组成的复合体对特异性靶点识别，造成靶位点DNA双链断裂后，细胞以外源携带目标点突变的ssOND作为模板进行同源重组修复（HDR），将目标点突变重组到基因组靶位点，达到基因点突变目的。
gRNA识别并结合在目标基因区域引导cas9蛋白对结合位点进行切割，引起DNA双链断裂（DSB），细胞以外源携带敲入片段的Donor作为模板进行同源重组修复（HDR），将敲入片段重组到基因组靶位点，达到基因敲入目的，实现外源基因的表达。
通过化学转染法、电转法或脂质体介导法将gRNA和Cas9转入细胞中，根据转染方法不同进行不同时长的药筛，药筛完成后挑选单克隆培养。选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序验证，筛选出基因敲除的阳性克隆。
